沒(méi)有一種培養(yǎng)基能夠一步便100%確定樣品中是否含有某種細(xì)菌,檢驗(yàn)樣品中是否含有某種細(xì)菌,往往需要多步生化反應(yīng)判斷或輔以血清學(xué)或PCR檢測(cè)。如何在檢驗(yàn)中抑制干擾菌同時(shí)找出我們需要的目標(biāo)菌,盡量避免出現(xiàn)假陰性(實(shí)際樣本含目標(biāo)菌,但未檢出,此時(shí)為假陰性)或假陽(yáng)性(實(shí)際樣本不含目標(biāo)菌,但檢出,此時(shí)為假陽(yáng)性)一直是微生物檢驗(yàn)工作中的重點(diǎn)和難點(diǎn)。本系列旨在以GB.4789系列為基礎(chǔ),淺談可能出現(xiàn)的假陰性與假陽(yáng)性情況。
檢驗(yàn)沙門(mén)氏菌屬時(shí),由于其種類(lèi)繁多,生化反應(yīng)各異,且在生活中十分常見(jiàn)、送檢樣本多,非常容易在檢驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性的情況。
在《GB 4789.4-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)》(下文稱(chēng)《標(biāo)準(zhǔn)》)中,第一布首先需要進(jìn)行預(yù)增菌,這是為了避免樣品中的沙門(mén)氏菌受損活力不佳導(dǎo)致選擇性增菌后無(wú)沙門(mén)氏菌檢出,導(dǎo)致假陰性。第二步選擇性增菌時(shí),則同時(shí)選取了亞xi酸鹽胱氨酸增菌液(SC)和四硫磺酸鹽煌綠增菌液(TTB)兩種選擇性增菌培養(yǎng)基來(lái)對(duì)沙門(mén)氏菌進(jìn)行增菌,這是因?yàn)镾C與TTB各自的抑菌性不同,對(duì)不同種類(lèi)沙門(mén)氏菌的增菌效果也不同。SC的抑菌性相對(duì)較弱,TTB抑菌性相對(duì)較強(qiáng)。避免選取單一增菌液造成后續(xù)結(jié)果出現(xiàn)假陰性。
而在接下來(lái)的菌種分離挑選可疑菌落的過(guò)程中,則必選亞硫酸鉍(BS)瓊脂,沙門(mén)氏菌顯色、HE瓊脂、XLD瓊脂三選一,這也是因?yàn)椴煌囵B(yǎng)基,對(duì)于不同沙門(mén)氏菌的選擇性并不完相同,這樣選擇可以盡可能提高檢出率避免假陰性。
在此步驟經(jīng)常有人會(huì)產(chǎn)生疑問(wèn),為什么HE、XLD、BS上幾乎所有形態(tài)的菌落都被納入了可疑菌落,為什么顯色平皿上已經(jīng)顯色卻不能直接判定有沙門(mén)氏菌?其實(shí),沙門(mén)氏菌種類(lèi)繁多,常見(jiàn)的沙門(mén)氏菌多數(shù)為硫化氫反應(yīng)陽(yáng)性,在HE\XLD\BS上呈現(xiàn)出黑色中心菌落,但也應(yīng)注意到,部分沙門(mén)氏菌,如甲型副傷寒沙門(mén)氏菌,硫化氫反應(yīng)陰性或硫化氫產(chǎn)生較少,此時(shí)他們會(huì)呈現(xiàn)出無(wú)色菌落。部分沙門(mén)氏菌,如亞利桑那沙門(mén)氏菌,也可發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸,呈現(xiàn)周?chē)S色的菌落而部分變形桿菌屬細(xì)菌,也會(huì)產(chǎn)生硫化氫,導(dǎo)致菌落產(chǎn)生黑色中心。而《標(biāo)準(zhǔn)》中對(duì)于可疑目標(biāo)菌落的樣式,也有詳細(xì)的說(shuō)明。而沙門(mén)顯色培養(yǎng)基,雖然對(duì)沙門(mén)氏菌具有高度的特異性,但是一些非沙門(mén)氏菌屬的細(xì)菌,也會(huì)呈現(xiàn)紫色(此處紫色為沙門(mén)氏菌顯色培養(yǎng)基第二代上沙門(mén)氏菌呈現(xiàn)的典型顏色),造成假陽(yáng)性,因此不能僅憑沙門(mén)氏菌顯色平皿的顏色反應(yīng)就直接判定是否含有沙門(mén)氏菌,必須進(jìn)行下一步的生化鑒定,必要時(shí)進(jìn)行血清學(xué)分型。
由此我們可以發(fā)現(xiàn),在《標(biāo)準(zhǔn)》中,都是為了盡可能的檢出沙門(mén)氏菌,避免假陰性,而選用了多種培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),在檢驗(yàn)中是不可以只做某一種或只做某一步的,否則會(huì)極大增加假陰性出現(xiàn)的概率。
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