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在生物實驗室里,給細(xì)胞“數(shù)數(shù)"和“判斷死活"是再日常不過的操作。傳統(tǒng)上,我們依賴臺盼藍(lán)染色或AO/PI熒光染色——染了色的死細(xì)胞變藍(lán)或發(fā)熒光,沒染色的活細(xì)胞保持透明。

這個方法用了快一百年,但問題也不少:
染料可能對細(xì)胞產(chǎn)生輕微毒性;
染料沉淀會干擾識別,導(dǎo)致計數(shù)不準(zhǔn);
最關(guān)鍵的是,臺盼藍(lán)只能區(qū)分“活"與“死",對處于“凋亡"過程中的細(xì)胞毫無辦法。
那么,有沒有一種方法,不染色、不傷細(xì)胞、還能看清細(xì)胞從健康到死亡的全過程?
梅特勒托利多最近推出的 CytoDirect 數(shù)字全息無染色細(xì)胞計數(shù)儀,給出了答案。
?? 核心技術(shù):數(shù)字全息 + 機(jī)器學(xué)習(xí)
CytoDirect 內(nèi)部沒有傳統(tǒng)顯微鏡的目鏡和物鏡,而是采用數(shù)字全息顯微鏡技術(shù)(DHM)。它通過激光干涉生成細(xì)胞的全息圖,再通過算法重建出細(xì)胞的相位圖像。因為活細(xì)胞、死細(xì)胞、細(xì)胞碎片對光的折射率不同,軟件能自動將它們區(qū)分開來。
在此基礎(chǔ)上,儀器搭載了基于CNN卷積神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的機(jī)器學(xué)習(xí)算法,可以精準(zhǔn)分類:
活細(xì)胞
凋亡中細(xì)胞
死細(xì)胞
細(xì)胞碎片
這意味著,你不僅能知道細(xì)胞活率,還能看到凋亡的比例——這對于藥物毒性評估、培養(yǎng)條件優(yōu)化非常有用。
? 極簡操作:15秒出結(jié)果
CytoDirect 的操作簡單到幾乎不需要培訓(xùn):
制備細(xì)胞懸液(無需任何染色)
吸取20μL樣品加到專用計數(shù)板上
將計數(shù)板插入儀器,自動開始檢測
15秒后,屏幕上顯示濃度、活率、凋亡比例等數(shù)據(jù)
一鍵導(dǎo)出PDF或CSV報告
而且它不需要手動找焦平面,避免了不同操作者之間的對焦誤差,重復(fù)性佳。
?? 參數(shù)與性能
檢測范圍:3μm – 78μm,覆蓋絕大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞(CHO、HEK293、MSC等)
檢測速度:單次15秒
活率閾值:可自定義,適應(yīng)不同細(xì)胞系的判斷標(biāo)準(zhǔn)
數(shù)據(jù)一致性:與流式細(xì)胞術(shù)高度相關(guān)
?? 與傳統(tǒng)方法的對比
方法 | 染色 | 速度 | 對焦 | 識別能力 |
庫爾特法 | 無需 | 較慢 | 手動 | 僅計數(shù),不分死活 |
流式細(xì)胞術(shù) | 需要 | 慢 | 手動 | 可分群,但操作復(fù)雜 |
明場成像 | 必須 | 中等 | 手動 | 易受雜質(zhì)干擾 |
CytoDirect | 免染色 | 15秒 | 自動 | 死活+凋亡+碎片 |
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