一、UPLC液相色譜柱日常沖洗規(guī)范
使用后即時沖洗
每次樣品檢測結(jié)束后，先用10% 甲醇 - 水或乙腈 - 水沖洗 20～30 倍柱體積，沖去殘留樣品、緩沖鹽、離子對試劑，避免鹽類結(jié)晶、樣品吸附污染色譜柱。
含緩沖鹽流動相沖洗順序
先純水相沖洗除鹽 → 再用高比例有機相(甲醇 / 乙腈)沖洗疏水雜質(zhì)，嚴禁直接用純有機相沖洗含鹽流動相，防止鹽析出堵柱。
流速與壓力控制
UPLC 色譜柱粒徑小、柱壓高，沖洗流速不宜過高，一般控制在0.3–0.5 mL/min，避免壓力驟升損傷填料。
二、不同污染物針對性沖洗
鹽類、極性雜質(zhì)：純水或低比例有機相長時間沖洗
疏水蛋白、大分子雜質(zhì)：甲醇 / 乙腈梯度沖洗，必要時用 90% 有機相低速沖洗
離子對試劑殘留：用甲醇 - 水 - 0.1% 甲酸或乙腈 - 水體系，長時間梯度洗脫去除
三、色譜柱再生方法
反相 C18 類 UPLC 柱再生
依次沖洗：純水 → 10% 甲醇 → 50% 甲醇 → 90% 甲醇 → 反向梯度回沖，每步 20～30 柱體積；污染嚴重可短暫使用少量異丙醇低速沖洗。
正相 / 親水色譜柱再生
使用正己烷、異丙醇、乙醇依次沖洗，避免水相長時間接觸，防止填料水解。
離子交換柱再生
用高低濃度鹽溶液交替沖洗，去除吸附的帶電雜質(zhì)，再用純水、有機相平衡。
四、再生禁忌與注意事項
再生僅適用于輕度污染、柱效輕微下降，柱塌陷、填料流失時無法再生。
禁止使用強酸強堿、強氧化劑沖洗 UPLC 柱，避免鍵合相脫落。
再生全程低流速、緩慢梯度，防止柱壓過高損壞色譜柱。
再生完成后，用常規(guī)流動相平衡 30–60 min，待基線平穩(wěn)后再使用。
五、UPLC液相色譜柱長期保存沖洗要求
長期不用時，用80% 甲醇或乙腈水溶液封存，兩端擰緊堵頭，常溫避光保存，避免干燥、微生物滋生。
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