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(PVB19)細小病毒B19探針法熒光定量PCR試劑盒本試劑盒可用于檢測細小病毒 B19。細小病毒 B19(Parvovirus B19)引起的典型疾病是傳染性紅斑和急性關節(jié)病，在妊娠婦女可引起胎兒水腫乃至死胎。因此快速靈敏檢測細小病毒 B19 有重要意義。本產(chǎn)品是根據(jù)探針法熒光定量 PCR 原理開發(fā)的細小病毒 B19 檢測試劑盒，它具有下列特點：（詳細說明書可以咨詢客服索?。?/span>
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物等組分經(jīng)過優(yōu)化，靈敏度高。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)細小病毒 B19 DNA 序列高度保守區(qū)設計，不會跟其他病毒的 DNA 發(fā)生交叉反應。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為 5 個數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
(PVB19)細小病毒B19探針法熒光定量PCR試劑盒使用方法
一、DNA 提取(樣本制備區(qū))
1. （選做）如果有 N 個樣品待提取，最好設置 N+2 個提取，多出的是 PC（樣品制備陽性對照）和 NC（樣品制備陰性對照）?？梢匀￡栃詫φ盏?1000 倍稀釋液 10μL 再加上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作為 PC。另外用水作為NC。
2. 用自選方法提取純化樣品 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。建議使用病毒基因組 DNA 提取試劑盒（Cat: GZ010701-50）提取 DNA
二、稀釋標準曲線樣品(樣本制備區(qū))
（由于陽性對照濃度高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，避免污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光模板稀釋液，（最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。若無需制作標準曲線，將陽性對照稀釋到 1×10E5 拷貝/μL 即可。
(PVB19)細小病毒B19探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)果分析
1. 如果制作標準曲線，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，推算出其濃度。
2. 如果未制作標準曲線，按照如下標準判定結(jié)果：
陽性對照（1×10E5 拷貝/μL）結(jié)果：Ct 值<30，有明顯指數(shù)增長，呈典型的 S 型曲線。
陰性對照結(jié)果：Ct 值>40 或無 Ct 值，無明顯指數(shù)增長期和平臺期。
樣本檢測結(jié)果：Ct 值<38，有明顯指數(shù)增長，表明樣本中檢測出細小病毒 B19，
結(jié)果為陽性；Ct 值>40 或無 Ct 值，表明樣本中未檢測出細小病毒 B19，
結(jié)果為陰性；Ct值在 38-40 范圍，應對樣本進行復檢，
如重復實驗結(jié)果 Ct 值仍在 38-40 范圍，有明顯指數(shù)增長，則判定為陽性，否則為陰性。
