產(chǎn)品核心規(guī)格

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的抗CP110抗體（貨號(hào)A301-343A）是一款靶向中心體蛋白CP110（又稱(chēng)CCP110、Cep110）的兔多克隆抗體。該抗體經(jīng)抗原親和純化，以Whole IgG形式提供，未偶聯(lián)標(biāo)記，適用于免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）檢測(cè)人源樣本。關(guān)鍵參數(shù)匯總?cè)缦拢?/span>

參數(shù) 詳細(xì)信息

靶點(diǎn) CP110 / CCP110（中心體卷曲螺旋蛋白110 kDa）

反應(yīng)性 人

應(yīng)用 IP、WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

格式 Whole IgG

濃度 200 µg/ml

純化方式 抗原親和純化

同種型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

免疫原與表位特異性

該抗體通過(guò)針對(duì)人CP110蛋白內(nèi)部區(qū)域的特異性表位進(jìn)行親和純化獲得。具體而言，識(shí)別表位位于第575位至第625位殘基之間（對(duì)應(yīng)蛋白序列編號(hào)基于CAH18111.1，GeneID 9738）。免疫原為人CP110蛋白的該區(qū)域（600-650區(qū)間）。

技術(shù)要點(diǎn)：CP110分子量約110 kDa，其C末端包含卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域，參與蛋白二聚化和與中心體其它組分的相互作用。靶向575-625區(qū)域（位于CP110中部偏C端）的抗體可特異性識(shí)別全長(zhǎng)CP110，同時(shí)避免與N端其他中心體蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。該區(qū)域包含可能的磷酸化位點(diǎn)和SCF泛素化連接酶的識(shí)別基序，適用于研究CP110的細(xì)胞周期依賴(lài)性調(diào)控。生產(chǎn)中采用固相固定化表位親和純化，確保高特異性和低背景?？贵w濃度通過(guò)比爾定律測(cè)定，以1 mg/ml IgG在A280吸光度1.4為標(biāo)準(zhǔn)。

儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存條件：2 8°C

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液組成：Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉（防腐劑）

應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)方案

通用方法

所有免疫印跡實(shí)驗(yàn)均使用5% Milk-TBST作為封閉液和抗體稀釋液。一抗孵育條件為過(guò)夜（推薦4°C搖動(dòng)孵育）。

檢測(cè)體系

實(shí)驗(yàn)類(lèi)型 推薦檢測(cè)抗體

細(xì)胞裂解液Western Blot 羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀物Western Blot 抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）

推薦工作濃度

應(yīng)用 推薦稀釋度/用量

免疫沉淀（IP） 6 µg/mg裂解物

免疫印跡（WB） 1:2000 1:10000

詳細(xì)實(shí)驗(yàn)提示：

免疫印跡（WB）：推薦起始稀釋比為1:2000。CP110分子量約為110 kDa，在多數(shù)人細(xì)胞系（如HeLa、HEK293T、U2OS）中表達(dá)水平中等。若信號(hào)過(guò)強(qiáng)可提高至1:5000-1:10000；若信號(hào)弱可降至1:1000。建議使用HeLa細(xì)胞全裂解液作為陽(yáng)性對(duì)照。注意CP110在細(xì)胞周期中表達(dá)水平波動(dòng)：G1期較低，S期升高，G2/M期達(dá)到峰值，有絲分裂后期被降解。使用同步化細(xì)胞可獲得更一致的信號(hào)。轉(zhuǎn)膜后使用5% Milk-TBST室溫封閉1小時(shí)，一抗4°C孵育過(guò)夜，二抗室溫孵育1小時(shí)，ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。

免疫沉淀（IP）：按照6 µg抗體/mg總蛋白裂解物的比例加入抗體。由于CP110參與中心體復(fù)合物，推薦使用溫和裂解條件（如含50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5%脫氧膽酸鈉及蛋白酶抑制劑）以保持蛋白相互作用。避免使用SDS或強(qiáng)變性劑。抗體與裂解物在4°C旋轉(zhuǎn)孵育2-4小時(shí)或過(guò)夜，然后加入Protein A/G磁珠，繼續(xù)孵育1-2小時(shí)。用裂解緩沖液洗滌3-5次后，用1× SDS上樣緩沖液95°C加熱5分鐘洗脫免疫復(fù)合物。

IP后WB檢測(cè)：推薦使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體（配合5%正常豬血清封閉）進(jìn)行檢測(cè)。CP110分子量（~110 kDa）與兔IgG重鏈（~55 kDa）無(wú)重疊，因此使用常規(guī)抗重輕鏈二抗也可接受。但輕鏈特異性HRP可消除IP洗脫液中可能存在的重鏈降解片段或非特異性沉淀的背景信號(hào)，提高數(shù)據(jù)質(zhì)量。若使用常規(guī)二抗，目標(biāo)條帶區(qū)域（100-120 kDa）通常不會(huì)受重鏈干擾。

別名

centriolar coiled-coil protein 110kDa、centriolar coiled-coil protein of 110 kDa、centrosomal protein CP110、centrosomal protein of 110 kDa、Cep110、CP110

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)總結(jié)

特異性表位親和純化：靶向575-625區(qū)域（CP110中部偏C端），區(qū)別于靶向N端或C端卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域的抗體，適用于檢測(cè)全長(zhǎng)蛋白及可能的磷酸化/泛素化修飾形式。

寬工作濃度范圍：WB稀釋比1:2000-1:10000，兼容從高表達(dá)（同步化S/G2期細(xì)胞）到低表達(dá)（G1期細(xì)胞）樣本的相對(duì)定量分析。

高效IP性能：6 µg/mg裂解物的推薦用量確保高效捕獲內(nèi)源性CP110及其互作蛋白（如Cep97、Cep290、SCF復(fù)合物組分）。

親和純化高濃度：200 µg/ml濃度，經(jīng)抗原親和純化去除血清蛋白和非特異性抗體，確保低背景和高信噪比。

穩(wěn)定儲(chǔ)存：2-8°C年效期，無(wú)需分裝或-20°C冷凍，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的效價(jià)損失，保障批次間實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性。