一、產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本品為兔源抗Rad21多克隆抗體（貨號：A300-080A），經(jīng)抗原親和純化制備，以未標(biāo)記的完整IgG形式提供。該抗體特異性識別人類和鼠源的Rad21蛋白（亦稱SCC1，黏連蛋白復(fù)合物亞基），適用于免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）應(yīng)用，是研究有絲分裂、減數(shù)分裂染色體分離及DNA損傷修復(fù)的關(guān)鍵工具。

二、核心產(chǎn)品參數(shù)

參數(shù)項(xiàng)目 | 具體規(guī)格

靶標(biāo)蛋白 | Rad21

反應(yīng)種屬 | 小鼠、人

宿主來源 | 兔

克隆類型 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原區(qū)域 | 第581位至C末端

抗體亞型 | IgG

標(biāo)記類型 | 未標(biāo)記

純化方式 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

工作濃度 | 1000 µg/ml（1 mg/ml）

保存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖體系 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

三、推薦應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)條件

3.1 應(yīng)用稀釋度匯總

應(yīng)用技術(shù) | 推薦用量/稀釋度 | 備注

免疫沉淀（IP） | 6 µg / mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6微克抗體

蛋白質(zhì)印跡（WB） | 1:10,000 - 1:25,000 | 寬稀釋范圍，高靈敏度，建議從1:10,000起始

3.2 蛋白質(zhì)印跡（WB）專用實(shí)驗(yàn)條件

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育方式：過夜孵育（不可縮短）

細(xì)胞裂解物Western Blot：

推薦二抗：山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

免疫沉淀產(chǎn)物的Western Blot：

推薦二抗：抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記抗體

封閉液補(bǔ)充：需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

*重要提示：使用輕鏈特異性二抗可避免免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中抗體重鏈（約55 kDa）的交叉檢測干擾，Rad21分子量約為75 kDa，重鏈信號不直接影響目標(biāo)位置，但仍建議遵循此標(biāo)準(zhǔn)以獲得最佳信噪比。

四、免疫原與表位信息

4.1 免疫原區(qū)域

本抗體免疫原對應(yīng)人Rad21蛋白第581位至C末端之間的區(qū)域。依據(jù)NP_006256.1（GeneID 5885）的編號體系，人Rad21全長631個(gè)氨基酸，因此表位映射在581–631位氨基酸之間（即C末端區(qū)域）。

4.2 表位位置

抗體識別的特異性表位位于C末端區(qū)域。Rad21蛋白是一種“kleisin"家族成員，其C末端參與與SMC1/SMC3 ATPase結(jié)構(gòu)域的相互作用，對于黏連蛋白環(huán)的結(jié)構(gòu)完整性和功能至關(guān)重要。該區(qū)域也是caspase蛋白酶切割的位點(diǎn)所在（在凋亡信號通路中發(fā)生特異性切割）。

五、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

推薦儲(chǔ)存條件：2°C至8°C冷藏，切勿冷凍（冷凍會(huì)導(dǎo)致蛋白變性及抗體活性喪失）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液成分：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉作為防腐劑

pH范圍：7–8的寬泛pH范圍提供了良好的緩沖穩(wěn)定性

運(yùn)輸建議：冷藏運(yùn)輸，避免反復(fù)溫度波動(dòng)

六、主要生物學(xué)功能：

1. 姐妹染色單體黏連：在有絲分裂和減數(shù)分裂過程中，黏連蛋白復(fù)合物環(huán)繞姐妹染色單體，將其從DNA復(fù)制后到分裂后期前維持在一起，確保正確的染色體分離。

2. DNA雙鏈斷裂修復(fù)：Rad21通過同源重組途徑參與DNA雙鏈斷裂的修復(fù)。在DNA損傷時(shí)，黏連蛋白被募集到斷裂位點(diǎn)，將姐妹染色單體拉近以作為修復(fù)模板。

3. 凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)：Rad21已被證實(shí)可被caspase蛋白酶切割。在凋亡信號通路中，caspase介導(dǎo)的Rad21切割觸發(fā)姐妹染色單體的過早分離，是凋亡程序性細(xì)胞死亡的生化標(biāo)志之一。

七、使用注意事項(xiàng)

1. 疊d化鈉警示：緩沖液含0.09%疊d化鈉，該化合物具毒性，操作時(shí)請佩戴手套和護(hù)目鏡，避免接觸皮膚或吸入氣溶膠。

2. 高濃度特性：本抗體濃度為1000 µg/ml（1 mg/ml），屬于高濃度制劑。進(jìn)行IP實(shí)驗(yàn)時(shí)按6 µg/mg裂解物用量吸取少量即可，建議使用低吸附吸頭以提高移液準(zhǔn)確性。

3. IP用量計(jì)算：推薦用量為6 µg抗體/mg總蛋白裂解物。示例：若細(xì)胞裂解物總蛋白為2 mg，則需加入12 µg抗體（即12 µl，因濃度為1 µg/µl）。

4. 二抗選擇：

檢測細(xì)胞裂解物WB時(shí)，可使用識別重鏈和輕鏈的二抗（如A120-101P）

檢測IP產(chǎn)物WB時(shí)，建議使用抗兔IgG輕鏈HRP標(biāo)記抗體，并添加5%正常豬血清以降低非特異性背景。雖然Rad21分子量（約75 kDa）與抗體重鏈（約55 kDa）位置不同，使用輕鏈特異性二抗仍可消除任何潛在的重鏈干擾，并提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的專業(yè)性。

5. 過夜孵育要求：WB實(shí)驗(yàn)中一抗需過夜孵育（建議4°C緩慢搖動(dòng)），請勿縮短至室溫1–2小時(shí)，否則可能顯著降低檢測靈敏度，特別是在檢測低豐度Rad21或切割片段時(shí)。

6. 反應(yīng)種屬確認(rèn)：本經(jīng)驗(yàn)證可識別人和小鼠Rad21。對于大鼠等其他物種，建議通過序列比對評估交叉反應(yīng)可能性，并進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

7. Caspase切割產(chǎn)物的檢測：由于本抗體識別的表位位于C末端（581–631位氨基酸），而caspase切割位點(diǎn)位于C末端區(qū)域附近，因此該抗體可能無法檢測被切割后釋放的C末端小片段，但可識別保留完整C末端的全長Rad21及N末端切割產(chǎn)物。設(shè)計(jì)凋亡實(shí)驗(yàn)時(shí)請注意此特性。

*本說明書基于產(chǎn)品特性研究編寫，使用者應(yīng)結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行優(yōu)化驗(yàn)證