一、產(chǎn)品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本產(chǎn)品為兔源抗人SMC1蛋白第966位絲氨酸磷酸化（pS966）的特異性多克隆抗體（貨號(hào)：A300-050A）。SMC1（structural maintenance of chromosomes 1）是黏連蛋白（cohesin）復(fù)合物的核心亞基之一，與SMC3形成異源二聚體，構(gòu)成環(huán)狀結(jié)構(gòu)包裹姐妹染色單體，確保有絲分裂和減數(shù)分裂中染色體的正確分離。SMC1 Ser966的磷酸化是DNA損傷應(yīng)答（DDR）中的關(guān)鍵事件，由ATM/ATR激酶介導(dǎo)，參與同源重組修復(fù)及細(xì)胞周期檢查點(diǎn)調(diào)控。本抗體經(jīng)磷酸化表位特異性親和純化，適用于免疫細(xì)胞化學(xué)/免疫熒光（ICC-IF）、免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）及免疫印跡（WB）等多種應(yīng)用，是研究染色體穩(wěn)定性、DNA損傷修復(fù)及細(xì)胞周期調(diào)控的核心工具。

二、詳細(xì)規(guī)格

參數(shù) | 規(guī)格

靶標(biāo) | SMC1磷酸化（Ser966）

反應(yīng)種屬 | 人

應(yīng)用 | ICC-IF, IHC, IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全I(xiàn)gG

免疫原 | 圍繞人SMC1第966位絲氨酸的磷酸化合成肽（參考序列NP_006297.2）

抗體類型 | IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 ug/ml（1 mg/ml）

儲(chǔ)存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09% 疊氮鈉

三、產(chǎn)品制備

本抗體采用固相載體固定的磷酸化SMC1（Ser966）特異性表位進(jìn)行親和純化。免疫原為磷酸化合成肽段，對(duì)應(yīng)人SMC1（GeneID 8243，蛋白編號(hào)NP_006297.2）第966位絲氨酸周圍的氨基酸序列。通過親和層析富集磷酸化特異性抗體，去除非磷酸化反應(yīng)及非特異性抗體。免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定（1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4）。

四、推薦應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)條件

所有Western blot實(shí)驗(yàn)建議使用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液和抗體稀釋液，一抗孵育條件為4°C過夜。以下為各應(yīng)用的推薦起始條件：

應(yīng)用 | 推薦稀釋度/用量 | 備注

Western Blot (WB) | 1:2,000 – 1:10,000 | 檢測細(xì)胞裂解液時(shí)，二抗推薦山羊抗兔IgG（H+L）（貨號(hào)A120-101P）；檢測免疫沉淀物時(shí)，二抗建議使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，并在封閉液中加入5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）以消除重鏈干擾。

Immunoprecipitation (IP) | 6 ug/mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6 ul抗體（1 mg/ml濃度對(duì)應(yīng)6 ug）。推薦與Protein A/G磁珠孵育2–4小時(shí)或過夜。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:1,000 – 1:5,000 | 對(duì)福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)（高壓或微波）。

Immunocytochemistry/Immunofluorescence (ICC-IF) | 1:500 – 1:5,000 | 推薦使用4%甲醛固定細(xì)胞，然后用0.1–0.5% Triton X-100透化。甲醛固定可保留磷酸化表位，避免使用甲醇（可能破壞抗原）。

DNA損傷誘導(dǎo)建議：為檢測SMC1 pS966信號(hào)，需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行DNA損傷處理，常用方案包括：

紫外線（UV）照射：20–50 J/m2，收獲前修復(fù)1–4小時(shí)。

電離輻射（IR）：2–10 Gy，收獲前修復(fù)1–2小時(shí)。

羥基脲（HU）：2 mM，處理16–24小時(shí)。

s裂霉素C（MMC）：0.5 ug/ml，處理24小時(shí)。

五、SMC1 pS966的生物學(xué)意義

DNA損傷應(yīng)答標(biāo)志物：SMC1 Ser966磷酸化是ATM/ATR下游直接事件，其動(dòng)力學(xué)與γH2AX相似，但具有更長的持續(xù)信號(hào)窗口，適用于檢測低劑量輻射或化學(xué)損傷。

細(xì)胞周期檢查點(diǎn)：磷酸化SMC1參與G2/M檢查點(diǎn)調(diào)控，防止損傷DNA進(jìn)入有絲分裂。

臨床相關(guān)性：SMC1A突變導(dǎo)致科妮莉亞·德朗格綜合征（Cornelia de Lange syndrome，CdLS2型），表現(xiàn)為多發(fā)性發(fā)育異常。此外，SMC1A在多種腫瘤中表達(dá)異?；蛲蛔?，影響基因組穩(wěn)定性。

六、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存條件：2 - 8°C，嚴(yán)禁冷凍。冷凍會(huì)導(dǎo)致抗體聚集及效價(jià)下降。

有效期：自收貨之日起1年，在2-8°C未稀釋、避光保存。

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸，收貨后請(qǐng)立即存放于2-8°C。

防腐劑：緩沖液含0.09%疊氮鈉，可抑制微生物生長。注意：疊氮鈉會(huì)抑制HRP活性，若用于非HRP檢測系統(tǒng)（如熒光）則無影響；若需去除，可通過透析或脫鹽柱處理。

七、注意事項(xiàng)

1. 僅限科研使用：不得用于臨床診斷或治療。

2. 磷酸化信號(hào)誘導(dǎo)：在常規(guī)培養(yǎng)細(xì)胞中，SMC1 Ser966磷酸化水平極低。必須對(duì)細(xì)胞進(jìn)行DNA損傷處理（如IR、UV、HU或MMC）才能檢測到顯著信號(hào)。未處理細(xì)胞可作為陰性對(duì)照。

3. 特異性驗(yàn)證：建議使用λ磷酸酶處理細(xì)胞裂解物作為對(duì)照，確認(rèn)條帶消失；或使用ATM/ATR抑制劑（如KU55933、咖f因）處理，觀察信號(hào)減弱。

4. 樣品制備：裂解液中必須添加磷酸酶抑制劑（如Na?VO?、NaF、β-甘油磷酸）和蛋白酶抑制劑，防止去磷酸化和降解。

5. IHC/ICC-IF注意事項(xiàng)：

甲醛固定可較好保留磷酸化表位，避免使用甲醇固定。

對(duì)FFPE切片，熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)（枸櫞酸鹽pH 6.0）是必需的。

建議同時(shí)進(jìn)行未損傷組織/細(xì)胞的陰性對(duì)照。

6. 安全操作：疊氮鈉有毒，操作時(shí)請(qǐng)佩戴手套。廢液按有害物處理。