一、產(chǎn)品概述

由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的本產(chǎn)品為山羊抗小鼠IgG-Fc片段的多克隆抗體（貨號：A90-131P），經(jīng)固相吸附確保類特異性，并通過親和層析純化后與辣根過氧化物酶（HRP）共價偶聯(lián)，酶與抗體的摩爾比為4:1。該抗體特異性識別小鼠IgG分子的Fc區(qū)域（重鏈恒定區(qū)），而不與Fab片段或輕鏈發(fā)生交叉反應(yīng)，同時與IgA、IgM的交叉反應(yīng)可忽略不計。本品適用于酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）、免疫細胞化學(xué)（ICC）、免疫組織化學(xué)（IHC）及免疫印跡（WB）等多種檢測技術(shù)，是檢測或捕獲小鼠來源一抗的理想通用二抗試劑。

二、詳細規(guī)格

參數(shù) | 規(guī)格

靶標(biāo) | 小鼠IgG-Fc片段

反應(yīng)種屬 | 小鼠

應(yīng)用 | ELISA, ICC, IHC, WB

宿主 | 山羊

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

抗體類型 | IgG

偶聯(lián)物 | HRP（辣根過氧化物酶）

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 小鼠

濃度 | 1 mg/ml

儲存溫度 | 2 - 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | 磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.2% BSA及0.05% Pro-Clean 400

酶/抗體比例：偶聯(lián)前免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定（1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4），最終HRP與IgG摩爾比為4:1，確保高標(biāo)記效率同時保留抗體結(jié)合活性。

三、產(chǎn)品制備與質(zhì)量控制

本抗體的制備采用多步工藝，確保高特異性與低背景：

1. 免疫與血清采集：使用小鼠IgG-Fc片段作為免疫原免疫山羊，采集抗血清。

2. 固相吸附：抗血清通過固相吸附去除與IgA、IgM及其他血清蛋白交叉反應(yīng)的組分，確保類特異性。

3. 親和純化：將抗原（小鼠IgG-Fc）偶聯(lián)至瓊脂糖凝膠，通過親和層析分離特異性抗體。

4. HRP偶聯(lián)：純化后的抗體與辣根過氧化物酶按優(yōu)化比例（4:1）共價偶聯(lián)，經(jīng)純化去除游離酶。

5. 質(zhì)控驗證：

免疫電泳：確認(rèn)抗體僅與小鼠IgG-Fc形成沉淀弧，與IgA、IgM無反應(yīng)。

ELISA：直接法檢測顯示對小鼠IgG-Fc的滴度≥1:100,000，對小鼠IgA、IgM的交叉反應(yīng)<1%。

種屬交叉反應(yīng)測試：可能與其他物種（如大鼠、人）的IgG有輕度交叉，建議在使用前進行預(yù)實驗驗證。

四、推薦應(yīng)用與實驗條件

以下推薦稀釋度為起始參考值，不同實驗體系（樣本類型、一抗?jié)舛?、檢測靈敏度要求）可能需要進一步優(yōu)化。

應(yīng)用 | 推薦稀釋度 | 備注

ELISA | 1:10,000 – 1:100,000 | 用于直接或間接ELISA中檢測結(jié)合的小鼠一抗。建議進行棋盤滴定確定最佳工作濃度。底物推薦TMB或ABTS。

Immunocytochemistry (ICC) | 1:200 – 1:5,000 | 用于細胞爬片或培養(yǎng)細胞的免疫化學(xué)染色。固定透化后，孵育小鼠一抗，再以本二抗孵育。DAB或熒光底物均可使用。

Immunohistochemistry (IHC) | 1:200 – 1:5,000 | 適用于福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）及冰凍組織切片。需注意內(nèi)源性過氧化物酶的封閉（如3% H2O2）。

Western Blot (WB) | 1:5,000 – 1:50,000 | 用于檢測膜上由小鼠一抗識別的蛋白條帶。推薦使用5%脫脂牛奶-TBST封閉及稀釋抗體，室溫孵育1小時或4°C過夜。ECL化學(xué)發(fā)光檢測。

通用操作步驟：

1. 在完成一抗（小鼠來源）孵育并洗滌后，加入適當(dāng)稀釋的本HRP二抗。

2. 室溫孵育30–60分鐘。

3. 充分洗滌（WB建議3–5次，每次5分鐘；IHC/ICC建議3次，每次5分鐘；ELISA建議3–5次，每次3分鐘）。

4. 加入相應(yīng)底物顯色或化學(xué)發(fā)光檢測。

五、儲存與穩(wěn)定性

儲存條件：2 - 8°C，嚴(yán)禁冷凍。冷凍會導(dǎo)致酶失活及抗體聚集。

有效期：自收貨之日起1年，在未稀釋、2-8°C避光保存。

運輸條件：冰袋冷藏運輸，收貨后立即存放于2-8°C。

緩沖液成分：含0.2% BSA作為穩(wěn)定蛋白，0.05% Pro-Clean 400作為防腐劑（替代疊氮鈉，因為疊氮鈉會抑制HRP活性）。注意：本產(chǎn)品不含疊氮鈉，可直接用于HRP檢測體系。

避免污染：取用時應(yīng)使用無菌吸頭，避免反復(fù)開蓋。

六、注意事項

1. 僅限科研使用：不得用于臨床診斷或治療。

2. 內(nèi)源性過氧化物酶封閉：在進行IHC/ICC或ELISA時，若樣本含有內(nèi)源性過氧化物酶（如血液、組織中的紅細胞），需用0.3–3% H?O?處理10–20分鐘，否則會產(chǎn)生高背景。

3. 種屬交叉反應(yīng)：本抗體可能與其他物種的IgG發(fā)生交叉反應(yīng)（如大鼠、人）。在涉及多種屬樣本的實驗中，建議設(shè)置適當(dāng)?shù)年幮詫φ栈蝾A(yù)吸附。

4. 稀釋液選擇：建議使用含1% BSA或5%脫脂牛奶的PBS/TBST稀釋抗體，避免使用疊氮鈉作為防腐劑（會抑制HRP）。

5. 工作液穩(wěn)定性：稀釋后的抗體工作液應(yīng)在當(dāng)日使用完畢，不建議反復(fù)使用或長期保存。

6. 底物選擇：HRP的常用底物包括：

ELISA：TMB（450 nm檢測）、ABTS（405 nm）、OPD（492 nm）

WB：ECL化學(xué)發(fā)光底物

IHC/ICC：DAB（棕色沉淀）、AEC（紅色沉淀）

7. 對照設(shè)置：每次實驗應(yīng)設(shè)置僅加二抗（不加一抗）的陰性對照，以評估非特異性結(jié)合。