CD38（分化簇38，又稱環(huán)ADP核糖水解酶1）是一種跨膜糖蛋白和外切酶，在調(diào)節(jié)細胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。CD38是多發(fā)性骨髓瘤（MM）細胞表面高度表達的抗原，而在正常淋巴和髓系細胞中表達水平較低，因此成為免疫治療具有吸引力的靶抗原。2015年，F(xiàn)DA批準了靶向CD38的單克隆抗體daratumumab（Darzalex） 用于治療多發(fā)性骨髓瘤，標志著CD38靶向療法的重大突破。此外，CD38的表達還與HIV感染、白血病及2型糖尿病（T2D）相關(guān)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，肺癌患者中CD38的上調(diào)水平與患者生存率相關(guān)，其酶活性可促進細胞遷移、增殖及腫瘤進展。CD38也成為嵌合抗原受體T細胞（CAR-T）療法的熱門靶點，通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)構(gòu)建全人源CD38特異性CAR-T細胞，為CD38相關(guān)疾?。ㄈ绶伟╅_辟了新的治療途徑。

CD38具有兩種酶活性：水解酶活性（水解NAD?生成ADPR）和環(huán)化酶活性（催化NAD?生成環(huán)ADPR）。其中，環(huán)化酶活性在調(diào)節(jié)細胞內(nèi)鈣信號中尤為重要。為滿足科研人員在CD38環(huán)化酶活性抑制劑篩選及藥物發(fā)現(xiàn)中的需求，由艾美捷代理BPS Bioscience公司推出的CD38抑制劑篩選檢測試劑盒（環(huán)化酶活性）（貨號：71275） 提供了一套完整、靈敏、高通量兼容的解決方案。該試劑盒以96孔板格式為基礎(chǔ)，包含純化的重組人CD38酶（氨基酸43至C端）、特異性底物煙酰胺鳥嘌呤二核苷酸（NGD?）及優(yōu)化緩沖液，支持100次酶反應(yīng)，適用于環(huán)化酶活性的酶動力學(xué)研究及小分子抑制劑的高通量篩選（HTS）。

一、檢測原理：基于熒光法的環(huán)化酶活性測定

CD38的環(huán)化酶活性可催化NGD?（煙酰胺鳥嘌呤二核苷酸）生成環(huán)狀GDP-核糖（cGDPR）。與天然底物NAD?不同，NGD?被CD38環(huán)化后生成的cGDPR具有天然熒光特性（激發(fā)波長約300 nm，發(fā)射波長約410 nm）。因此，該試劑盒采用直接熒光檢測法：在反應(yīng)體系中加入CD38酶和NGD?底物，酶催化反應(yīng)生成熒光產(chǎn)物cGDPR，熒光強度與CD38環(huán)化酶活性成正比。當存在抑制劑時，酶活性被抑制，熒光信號降低。

這種“直接熒光"檢測模式具有以下優(yōu)勢：

均相免洗：無需分離產(chǎn)物或添加額外檢測試劑，實現(xiàn)“加樣-混合-孵育-讀數(shù)"的簡便操作。

實時監(jiān)測：可連續(xù)讀取熒光值，獲取酶反應(yīng)的初始速率，用于精確的動力學(xué)分析。

成本效益高：無需標記抗體或酶聯(lián)檢測試劑，降低單次實驗成本。

二、試劑盒核心組分與設(shè)計優(yōu)勢

1. 即用型完整組分，操作高效

試劑盒提供所有必需成分：

純化的重組人CD38酶（氨基酸43至C端）：保留完整的環(huán)化酶活性，無標簽干擾。

熒光底物NGD?：特異性檢測環(huán)化酶活性，背景熒光極低。

CD38檢測緩沖液：優(yōu)化pH和離子組成，確保酶反應(yīng)在最適條件下進行。

96孔微孔板（可選，部分規(guī)格包含）。

詳細的實驗操作說明書。

2. 支持酶動力學(xué)與抑制劑IC50測定

利用該試劑盒，研究人員可以：

測定酶動力學(xué)參數(shù)：通過改變NGD?底物濃度，計算CD38環(huán)化酶的Km、Vmax和kcat/Km，比較不同突變體或不同條件下的催化效率。

篩選小分子抑制劑：在固定酶和底物濃度下，加入梯度稀釋的待測化合物，孵育后讀取熒光值，計算抑制率并擬合IC50曲線。

高通量篩選（HTS）：96孔板格式兼容自動化移液工作站，可在單次實驗中完成數(shù)百個化合物的初篩。

3. 陽性對照建議

雖然試劑盒本身不提供陽性對照抑制劑，但文獻中已知的CD38環(huán)化酶抑制劑（如kuromanin、apigenin等）可作為陽性對照。建議用戶自行準備已知抑制劑，以驗證實驗體系的可靠性。BPS Bioscience也可提供推薦對照品（需另行購買）。

三、應(yīng)用場景與科研價值

1. 多發(fā)性骨髓瘤藥物篩選

Daratumumab的成功證實了CD38靶向治療的臨床價值。然而，單克隆抗體成本高、需注射給藥，且部分患者產(chǎn)生耐藥。小分子CD38環(huán)化酶抑制劑可作為替代或聯(lián)合治療策略。利用該試劑盒，可快速篩選能夠抑制CD38環(huán)化酶活性的小分子化合物，為開發(fā)口服CD38抑制劑提供先導(dǎo)化合物。

2. 肺癌及其他實體瘤研究

研究表明，CD38在肺癌患者中的上調(diào)與不良預(yù)后相關(guān)，其環(huán)化酶活性通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)鈣信號促進腫瘤細胞遷移、增殖和轉(zhuǎn)移。利用該試劑盒，可以評估候選化合物對肺癌細胞中CD38環(huán)化酶活性的抑制效果，為開發(fā)新型肺癌治療藥物提供實驗依據(jù)。此外，該試劑盒也適用于其他CD38相關(guān)實體瘤（如前列腺癌、胰腺癌）的藥物篩選。

3. 自身免疫病及炎癥疾病

CD38在調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）和髓系抑制細胞（MDSC）中的表達與免疫抑制功能相關(guān)。通過篩選CD38環(huán)化酶抑制劑，可能恢復(fù)抗腫瘤免疫或減輕自身免疫病理。該試劑盒可用于評估免疫調(diào)節(jié)劑對CD38酶活性的影響，拓展CD38靶點的應(yīng)用范圍。

4. 酶學(xué)機制與結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究

純化的重組CD38酶和特異性NGD?底物為結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究提供了理想工具。通過測定不同突變體的酶活性，可以定位CD38環(huán)化酶活性中心的關(guān)鍵氨基酸殘基，為理性藥物設(shè)計提供結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。

五、產(chǎn)品數(shù)據(jù)

六、文獻參考

Cui Q., et al., 2021 J Hematol Oncol. 14(1):82.

Gao L., et al., 2021 Cell Death Dis. 12(7):680.