檢測原理：

本方法借助 SDS - 聚丙烯酰胺凝膠電泳聯(lián)合凝膠染色技術(shù)，能夠同步檢測 MMP-2、MMP-9 活性以及無活性前體酶原譜系，檢測靈敏度可達nM級別，檢測性能優(yōu)于 ELISA 檢測方式。

實驗預(yù)先制備混合明膠底物的電泳凝膠，將待測生物樣本加入凝膠體系完成電泳分離。電泳體系內(nèi)的SDS可與基質(zhì)金屬蛋白酶可逆結(jié)合，破壞蛋白空間構(gòu)象，暫時抑制酶的水解活性，保障蛋白依據(jù)分子量差異完成有效分離。電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer孵育，MMP恢復(fù)活性，凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區(qū)域，從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。

檢測目的:

本試劑盒主要用于檢測相關(guān)的組織、細胞中MMP-2、MMP-9 酶譜活性。

本試劑盒可進行50 次標(biāo)準(zhǔn)膠檢測，如果每塊膠加樣孔可以10個以上，總體可以檢測500個樣本以上。

圖形示例和說明：（僅供參考，具體以實際條帶為準(zhǔn)）

如下圖1，該酶譜圖可依據(jù)分子量標(biāo)注 MMP 活性透明條帶分布，由于檢測樣品未做還原、高溫變性處理，條帶實際遷移位置和理論分子量數(shù)值并不準(zhǔn)確對應(yīng)。正常血漿陽性樣本能觀察到反襯透亮條帶，分別對應(yīng) 66kDa（MMP-2）、72kDa （MMP-2前體）、87kDa（MMP-9） 以及 92kDa （MMP-9前體）。血漿里活化形式的 66kDa MMP-2 含量稀少，加大上樣濃度后，可在前體 MMP-2 條帶下方見到淺淡條帶，對應(yīng)圖中最右側(cè)泳道。

注意事項：

1. 組織或細胞的蛋白樣品制備可用常規(guī)的方法，但需注意蛋白裂解液中不能加入EDTA，因為EDTA是金屬離子螯合劑，可以絡(luò)合Zn2+，抑制MMP的活性；也不能加入β-巰基乙醇或DTT，因為會導(dǎo)致蛋白的二硫鍵被打開，蛋白不能復(fù)性。

2. 考馬斯亮藍染色液含有醇類物質(zhì)，呈酸性，具有輕微腐蝕性，請穿戴好實驗服和一次性實驗手套，不要直接接觸。嚴禁入口。使用完成后，請密封保存

3. 凝膠干燥可使用聚丙烯酰胺凝膠干膠裝置室溫快速干燥凝膠，可以長時間的保存。

4. 凝膠染色之后，考馬斯亮藍染色液可以回收利用，裝入新容器內(nèi)，4oC保存，可反復(fù)使用2-3次。

5. 本試劑盒僅供科研實驗使用，不得用于食用、臨床醫(yī)療等其它用途。

6.實驗操作中，請穿戴好實驗服、防護口罩和一次性實驗手套，嚴禁直接接觸試劑。嚴禁入口。