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使用CSA技術(shù)的技巧
閱讀：1760 發(fā)布時(shí)間：2016-1-25
在使用CSA技術(shù)時(shí)，也應(yīng)注意某些組織細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性過氧化物酶、內(nèi)源性生物素的干擾。內(nèi)源性過氧化物酶可用0.3%～3%H202抑制其活性。 在使用CSA技術(shù)時(shí)，也應(yīng)注意某些組織細(xì)胞內(nèi)內(nèi)源性過氧化物酶、內(nèi)源性生物素的干擾。內(nèi)源性過氧化物酶可用0.3%～3%H202抑制其活性。
標(biāo)記的雜交探針或抗體的非特異性結(jié)合，以及其他目標(biāo)探針的非特異性結(jié)合放大，都可給實(shí)驗(yàn)的分析帶來困難。因?yàn)镃SA技術(shù)的顯著放大能力，對(duì)非特異性結(jié)合的信號(hào)也具有放大作用。
但因?yàn)镃SA具有*的敏感性，因此抗體和核酸探針可稀釋到相當(dāng)高的濃度，在目標(biāo)物達(dá)到飽和所需的濃度以下，這樣非特異性背景染色將大大降低或消失，而且稀釋度的提高還可節(jié)約昂貴試劑的用量。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞和組織內(nèi)含有生物素依賴的羧基酶，它是許多功能代謝必需的。當(dāng)使用生物素鏈霉親和素檢測系統(tǒng)時(shí)，這些含有生物素的酶產(chǎn)生很強(qiáng)的背景信號(hào)。在使用時(shí)應(yīng)預(yù)先封閉組織細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)源性生物素。
生物素化酪胺酰胺與HRP酶促反應(yīng)后，加熱可改進(jìn)CSA檢測敏感性。在孵育液中加入增加黏性的葡萄糖硫酸鹽、聚乙烯吡咯烷酮(poly-vinyl pyrrolidone，PVP)可降低苯氧基原子團(tuán)中間體的擴(kuò)散，使信號(hào)定位更為準(zhǔn)確。也有文獻(xiàn)報(bào)道證明在使用標(biāo)記的酪胺酰胺時(shí)，直接用HRP標(biāo)記探針對(duì)于降低非特異性結(jié)合尤其有用。 北京富瑞恒創(chuàng)科技有限公司。