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摘要
細胞間相互作用驅(qū)動基因表達的快速且異質(zhì)變化，但大多數(shù)轉(zhuǎn)錄組方法要么使細胞解離，失去配體身份和相互作用時機，要么通過配體-受體共表達間接推斷出交流。本文介紹了Cell-Cell-seq，一種可擴展的工作流程，用于以單細胞轉(zhuǎn)錄組分辨率分析定義的細胞對（“雙細胞"）。細胞-細胞測序使用含腔水凝膠微粒（納米小瓶）限制兩個細胞，同步接觸起始，保護易碎的結(jié)合體在搬運和分選過程中，并直接與基于液滴的RNA測序接口。利用抗原匹配的前列腺腫瘤細胞和工程化T細胞作為模型系統(tǒng)，Cell-Cell-seq捕獲了數(shù)千個腫瘤-T細胞對抗，揭示了相互作用間廣泛的功能和轉(zhuǎn)錄異質(zhì)性。雙胞胎揭示了在標準孔板共培養(yǎng)中被掩蓋的瞬態(tài)激活程序，這與大宗檢測中的異步接觸相符。為了區(qū)分交互誘導程序與復合的雙子轉(zhuǎn)錄組，我們開發(fā)了一個偽混合框架，在計算機模擬中生成偽雙子，構(gòu)建“無交互"下的經(jīng)驗無效分布，從而實現(xiàn)統(tǒng)計上穩(wěn)健地識別新興基因并由伴侶解析反應(yīng)歸因。雙細胞解析進一步揭示了協(xié)調(diào)的跨細胞程序，包括與雙向旁分泌信號一致的趨化因子表達，以及腫瘤免疫調(diào)節(jié)程序與T細胞激活之間的反向耦合。最后，我們引入ccRepair以糾正混合轉(zhuǎn)錄組中的組成稀釋，提升解釋性，同時保持真正的交叉細胞協(xié)調(diào)。Cell-Cell-seq共同提供了一個可推廣的平臺，用于解剖免疫突觸生物學，并繪制跨異質(zhì)細胞群體的相互作用依賴程序，應(yīng)用于腫瘤-免疫通訊的分析和功能性免疫療法篩查。
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