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光學(xué)顯微鏡是一種精密的光學(xué)儀器。當(dāng)前使用的顯微鏡由一套透鏡配合,因而可選擇不同的放大倍數(shù)對(duì)物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)進(jìn)行放大觀察。普通光學(xué)顯微鏡通常能將物體放大1500~2000倍(的分辨力為0.2μm)。
(一)光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)
1.光學(xué)部分 包括目鏡、物鏡、聚光器和光源等。
(1)目鏡 通常由兩組透鏡組成,上端的一組又稱(chēng)為“接目鏡",下端的則稱(chēng)為“場(chǎng)鏡"。兩者之間或在場(chǎng)鏡的下方裝有視場(chǎng)光闌(金屬環(huán)狀裝置),經(jīng)物鏡放大后的中間像就落在視場(chǎng)光闌平面上,所以其上可加置目鏡測(cè)微尺。在目鏡上方刻有放大倍數(shù),如10×、20×等。按照視場(chǎng)的大小,目鏡可分為普通目鏡和廣角目鏡。有些顯微鏡的目鏡上還附有視度調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu),操作者可以對(duì)左右眼分別進(jìn)行視度調(diào)整。另有照相目鏡(NFK)可用于拍攝。
(2)物鏡 由數(shù)組透鏡組成,安裝于轉(zhuǎn)換器上,又稱(chēng)接物鏡。通常每臺(tái)顯微鏡配備一套不同倍數(shù)的物鏡,包括:①低倍物鏡:指1×~6×;②中倍物鏡:指6×~25×;③高倍物鏡:指25×~63×;④油浸物鏡:指90×~100×。其中油浸物鏡使用時(shí)需在物鏡的下表面和蓋玻片的上表面之間填充折射率為1.5左右的液體(如香柏油等),它能顯著地提高顯微觀察的分辨率。其他物鏡則直接使用。觀察過(guò)程中物鏡的選擇一般遵循由低到高的順序,因?yàn)榈捅剁R的視野大,便于查找待檢的具體部位。
顯微鏡的放大倍數(shù),可粗略視為目鏡放大倍數(shù)與物鏡放大倍數(shù)的乘積。
(3)聚光器 由聚光透鏡和虹彩光圈組成,位于在載物臺(tái)下方。聚光透鏡的功能是將光線聚焦于視場(chǎng)范圍內(nèi);透鏡組下方的虹彩光圈可開(kāi)大縮小,以控制聚光器的通光范圍,調(diào)節(jié)光的強(qiáng)度,影響成像的分辨力和反差。使用時(shí)應(yīng)根據(jù)觀察目的,配合光源強(qiáng)度加以調(diào)節(jié),得到成像效果。
(4)光源 較早的普通光學(xué)顯微鏡借助鏡座上的反光鏡,將自然光或燈光反射到聚光器透鏡的作為鏡檢光源。反光鏡是由一平面和另一凹面的鏡子組成。不用聚光器或光線較強(qiáng)時(shí)用凹面鏡,凹面鏡能起會(huì)聚光線的作用;用聚光器或光較弱時(shí),一般都用平面鏡。
新近出產(chǎn)的顯微鏡一般直接在鏡座上安裝光源,并有電流調(diào)節(jié)螺旋,用于調(diào)節(jié)光照強(qiáng)度。光源類(lèi)型有鹵素?zé)簟㈡u絲燈、汞燈、熒光燈、金屬鹵化物燈等。
顯微鏡的光源照明方法分為兩種:透射型與反射(落射)型。前者是指光源由下而上通過(guò)透明的鏡檢對(duì)象;反射型顯微鏡則是以物鏡上方打光到(落射照明)不透明的物體上。
2. 機(jī)械部分 包括鏡座、鏡柱、鏡壁、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)和準(zhǔn)焦螺旋等。
(1)鏡座 基座部分,用于支持整臺(tái)顯微鏡的平穩(wěn)。
(2)鏡柱 鏡座與鏡臂之間的直立短柱,起連接和支持的作用。
(3)鏡臂 顯微鏡后方的弓形部分,是移動(dòng)顯微鏡時(shí)握持的部位。有的顯微鏡在鏡臂與鏡柱之間有一活動(dòng)的傾斜關(guān)節(jié),可調(diào)節(jié)鏡筒向后傾斜的角度,便于觀察。
(4)鏡筒 安裝在鏡臂先端的圓筒狀結(jié)構(gòu),上連目鏡,下連接物鏡轉(zhuǎn)換器。顯微鏡的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)筒長(zhǎng)為160 mm,此數(shù)字標(biāo)在物鏡的外殼上。
(5)物鏡轉(zhuǎn)換器 鏡筒下端的可自由旋轉(zhuǎn)的圓盤(pán),用于安裝物鏡。觀察時(shí)通過(guò)轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器來(lái)調(diào)換不同倍數(shù)的物鏡。
(6)載物臺(tái) 鏡筒下方的平臺(tái),有一圓形的通光孔。用于放置載玻片。載物臺(tái)上裝有固定標(biāo)本的彈簧夾,一側(cè)有推進(jìn)器,可移動(dòng)標(biāo)本的位置。有些推動(dòng)器上還附有刻度,可直接計(jì)算標(biāo)本移動(dòng)的距離以及確定標(biāo)本的位置。
(7)準(zhǔn)焦螺旋 裝在鏡臂或鏡柱上的大小兩種螺旋,轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)可使鏡筒或載物臺(tái)上下移動(dòng),從而調(diào)節(jié)成像系統(tǒng)的焦距。大的稱(chēng)為粗準(zhǔn)焦螺旋,每轉(zhuǎn)動(dòng)一圈,鏡筒升降10mm;小的為細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,轉(zhuǎn)動(dòng)一圈可使鏡筒僅升降0.1mm。一般在低倍鏡下觀察物體時(shí),以粗準(zhǔn)焦螺旋迅速調(diào)節(jié)物像,使之位于視野中。在此基礎(chǔ)上,或在使用高倍鏡時(shí),用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋微調(diào)。必須注意,一般顯微鏡裝有左右兩套準(zhǔn)焦螺旋,作用相同,但切勿兩手同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)兩側(cè)的螺旋,防止因雙手力量不均產(chǎn)生扭力,導(dǎo)致螺旋滑絲。
(二)普通光學(xué)顯微鏡的基本成像原理
光線→(反光鏡)→遮光器→通光孔→鏡檢樣品(透明)→物鏡的透鏡(次放大成倒立實(shí)像)→鏡筒→目鏡(再次放大成虛像)→眼。

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