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【厭氧培養(yǎng)技術(shù)指南】產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)方法及注意事項(xiàng)
閱讀：51 發(fā)布時(shí)間：2026-4-24指南目錄：
1、產(chǎn)氣莢膜梭菌概況
2、培養(yǎng)方法
3、檢驗(yàn)注意事項(xiàng)
產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種革蘭氏陽性厭氧菌，廣泛分布于污水、土壤等環(huán)境及人和動(dòng)物腸道中。既有“莢膜"護(hù)體，又可產(chǎn)生“芽孢"休眠，可以抵抗高溫、冷凍、高壓等各種環(huán)境不利條件，待到適宜的生存條件時(shí)，便可結(jié)束休眠狀態(tài)，繁殖產(chǎn)毒。
GB 4789.13-2012《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)》中規(guī)定了產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢驗(yàn)流程。
厭氧培養(yǎng)是產(chǎn)氣莢膜梭菌檢測(cè)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，通過TSC瓊脂在36℃±1℃厭氧環(huán)境中培養(yǎng)20~24小時(shí)，可特異性形成黑色菌落，排除好氧菌干擾并富集目標(biāo)菌。
產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)難點(diǎn)：
1、對(duì)氧十分敏感，暴露在空氣中時(shí)間過久即死亡
2、若厭氧環(huán)境不嚴(yán)苛，易受其他雜菌干擾
3、與其他梭菌形態(tài)相似，僅憑形態(tài)難以區(qū)分
產(chǎn)氣莢膜梭菌培養(yǎng)流程：
一、樣品制備及前處理：
原始樣品經(jīng)初步稀釋（25g（mL)+225mL稀釋液）均質(zhì)并系列稀釋后（根據(jù)樣品中菌含量）傾注至TSC瓊脂平板進(jìn)行產(chǎn)氣莢膜梭菌厭氧分離培養(yǎng)
二、培養(yǎng)：
1、打開DW-100A-K Plus智能厭氧微生物培養(yǎng)系統(tǒng)的電源開關(guān)
2、將處理好的平板放入系統(tǒng)配套厭氧罐內(nèi)，插入?yún)捬跖囵B(yǎng)專用催化劑，連接罐體與主機(jī)
3、選擇“厭氧培養(yǎng)"操作程序
4、設(shè)備啟動(dòng)，氣體置換程序自動(dòng)運(yùn)行，90秒后即可生成厭氧環(huán)境
5、將培養(yǎng)罐脫離主機(jī)，放入36 ℃±1 ℃的環(huán)境中培養(yǎng)20-24h
三、得出結(jié)論：
可通過生化方法或更為快速簡(jiǎn)便的[DW-MS 5500飛行質(zhì)譜微生物快速鑒定系統(tǒng)]進(jìn)行鑒定
實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)：
1、分離培養(yǎng)：TSC瓊脂的“雙層"接種
在TSC瓊脂平板上進(jìn)行分離時(shí)，傾注樣品后，務(wù)必再覆蓋一層培養(yǎng)基，使樣本與空氣隔絕開；其次可保護(hù)亞硫酸鹽還原反應(yīng)不受抑制，避免本該變黑的菌落呈現(xiàn)灰白色，造成誤判。
2、全程關(guān)鍵：嚴(yán)格維持厭氧環(huán)境
由于產(chǎn)氣莢膜梭菌對(duì)氧氣敏感，從分離培養(yǎng)到鑒定操作的整個(gè)過程中，必須時(shí)刻注意維持厭氧條件，以確保目標(biāo)菌的存活與生長(zhǎng)，避免假陰性結(jié)果。
實(shí)踐證明，DW-100A-K Plus智能厭氧微生物培養(yǎng)系統(tǒng)+生物安全柜組合的解決方案，由于系統(tǒng)能夠生成嚴(yán)格的厭氧環(huán)境、耗時(shí)極短，且接種及培養(yǎng)均在生物安全保護(hù)下進(jìn)行，可在兼顧培養(yǎng)效果的同時(shí)保障生物安全。
因此，DW-100A-K Plus智能厭氧微生物培養(yǎng)系統(tǒng)+生物安全柜組合可作為產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗(yàn)的日常方案。