電荷異質(zhì)體

單克隆抗體

近年來(lái)，單克隆抗體（mAbs）用于治療癌癥、自身免疫性疾病、心血管疾病、呼吸系統(tǒng)疾病、血液病以及多種感染等嚴(yán)重和慢性疾病展現(xiàn)重要作用。由于其巨大的治療價(jià)值和商業(yè)價(jià)值，在過(guò)去數(shù)年中一直位居十大最暢銷(xiāo)藥物之列，同時(shí)單克隆抗體也是獲批最多的生物制藥。

由于生產(chǎn)、加工或儲(chǔ)存過(guò)程中的翻譯后修飾（如糖基化、脫酰胺）或化學(xué)修飾（如氧化、異構(gòu)化），導(dǎo)致分子凈電荷改變。同時(shí)隨著運(yùn)輸?shù)鹊挠绊?，也?huì)出現(xiàn)不同的異質(zhì)體。電荷異質(zhì)體的檢測(cè)分析方法通常包括：等電聚焦（isoelectric focusing,IEF）凝膠電泳、毛細(xì)管等電聚焦（Capillary isoelectric focusing,cIEF）、成像毛細(xì)管等電聚焦（Imaged capillary isoelectric focusing,icIEF）、陽(yáng)離子交換色譜（Cation exchange chromatography,CEX）、陰離子交換色譜（Anion exchange chromatography,AEX）等。

多數(shù)單克隆抗體（mAb）等生物治療藥物的等電點(diǎn)（pI）在 7.0-9.0 之間，在中性偏酸的流動(dòng)相環(huán)境（如 pH 5.0-6.5）中呈正電荷狀態(tài)，能與陽(yáng)離子交換色譜柱的固定相高效結(jié)合。而陰離子交換色譜需抗體帶負(fù)，此時(shí)在高pH條件，抗體易發(fā)生結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定、聚集等問(wèn)題，影響分離準(zhǔn)確性。

陽(yáng)離子交換色譜（CEX）已成為表征單克隆抗體電荷異質(zhì)性的標(biāo)準(zhǔn)方法。陽(yáng)離子交換色譜（CEX）涉及兩種主要機(jī)制，即鹽梯度和pH梯度。在鹽梯度洗脫中，單克隆抗體電荷變體通過(guò)與流動(dòng)相中的鹽離子競(jìng)爭(zhēng)，從交換位點(diǎn)置換下來(lái)。在pH梯度洗脫中，單克隆抗體電荷當(dāng)pH值達(dá)到變體幾乎不帶電或完全不帶電的點(diǎn)時(shí)，變體就會(huì)從色譜柱中洗脫出來(lái)。電荷異質(zhì)體分析最常用的方法仍然采用鹽洗脫機(jī)制。重點(diǎn)關(guān)注方法的穩(wěn)健性，色譜過(guò)程中pH值的控制對(duì)于保持保留時(shí)間穩(wěn)定和方法穩(wěn)健性至關(guān)重要。離子交換柱本身具有固有的緩沖能力，可在分析過(guò)程中控制pH值。

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