1、最常見的做法：平板培養(yǎng)（傾注或涂布）→ 倒扣培養(yǎng)

A. 制版（簡要）

培養(yǎng)基常用：PDA（加氯霉素/抗生素抑制細菌）、DG18（低水活/耐干燥時用）、YGC/MEA（看方法要求）

接種方式一般是：

傾注法：樣品勻液 + 培養(yǎng)基混勻 → 凝固

或表面涂布：已凝固平板表面涂布（更利于酵母菌計數(shù)/形態(tài)）

B. 放進兩用箱前的“關(guān)鍵動作”（很多人忽略）

平板一定要倒扣（瓊脂面在上、蓋在下）

目的：防止冷凝水滴落到菌落上造成蔓延、互相污染。

邊緣可用 Parafilm/封口膜半透氣封邊（可選但很有用）：

減少培養(yǎng)基失水干縮

降低皿蓋內(nèi)冷凝水亂跑

（不要氣密封死，霉菌需要一點氣體交換）

如果是傾注法且瓊脂較淺/環(huán)境很干：可以在疊放層最上層空位放一塊空白平板當“擋風板”。

2、干燥培養(yǎng)兩用箱里的“正確養(yǎng)法”

設定參數(shù)

項目 推薦

模式 培養(yǎng)端（不要切到干燥高溫檔！）

溫度 25℃（±1℃） 或 28℃（±1℃）；多數(shù)國標傾向 25–28℃區(qū)間

時間 5 d（常規(guī)）/ 可視情況延到 7 d（尤其霉菌慢、低污染水平）

光照 盡量暗培養(yǎng)（或用箱子自帶半遮光；別放窗口曬）

風門/風機怎么處理（重點）

這類兩用箱很多是強制對流：

風門不要開太大（否則平板會更快失水、瓊脂縮邊、邊緣菌落異常）

更穩(wěn)妥的做法：

放在中層，不要緊貼后壁出風口

平板之間留縫（≥1 cm），不要“滿箱堵死”

擺放密度

箱內(nèi)負載一般別超過容積 2/3

平板單層擺放最好；必須疊放就用專用隔板/架，別直接堆高成塔（氣流不均+塌垛風險）

3、培養(yǎng)期間 & 讀數(shù)時的關(guān)鍵細節(jié)

盡量少開門；觀察用玻璃窗/手電。每次開門都會帶來冷凝與溫度漂移。

第 2–3 d可快速檢查：霉菌是否“蔓延成片”（稀釋不夠/沒加抑菌劑/培養(yǎng)太濕）

計數(shù)原則（通用）：

選 30–300 CFU（或你們方法規(guī)定的范圍）的平板

霉菌：如果菌絲蔓延但不重疊、還能分辨“起源點”，有些方法可計“菌落形成單位”；嚴重蔓延通常判 需重做/稀釋更高

酵母：一般按常規(guī)圓形光滑菌落計；注意區(qū)別“氣泡/沉淀”和真菌落

做完的培養(yǎng)平板：121℃ 高壓滅菌后再清洗（生物安全基本操作）。

4、常見坑（用兩用箱做霉菌酵母最容易踩）

誤切到“干燥檔/高溫”：直接把平板烤干 → 實驗報廢。

正放培養(yǎng)：冷凝水滴滴落 → 菌落蔓延一片，沒法計數(shù)。

風太大/太干：瓊脂縮邊、邊緣菌落變形、回收率下降（尤其 DG18 這類對水活敏感的體系）。

塞太滿：溫度場不均 → 一邊長得好一邊不長，重復性差。

用它當“防潮儲存柜”長期放培養(yǎng)基：不行——反復冷熱循環(huán)更容易凝露發(fā)霉。

• 科研干燥培養(yǎng)兩用箱

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