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內(nèi)容聲明：
您訪問的RIPA蛋白裂解液產(chǎn)品信息，由上海貝博生物科技有限公司自行發(fā)布提供，產(chǎn)品價格為面議，如您想了解更多關于RIPA蛋白裂解液型號、參數(shù)、用途等信息，歡迎咨詢。
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產(chǎn)品簡介
RIPA蛋白裂解液產(chǎn)品參數(shù)
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
RIPA蛋白裂解液詳細信息
RIPA蛋白裂解液產(chǎn)品概述
貝博® BBproExtra® RIPA裂解液采用優(yōu)質原料配制，對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用，是經(jīng)典常用的細組織快速裂解液。
本RIPA蛋白裂解液適用于從各種動物實體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等動物組織樣品中提取總蛋白。
本RIPA蛋白裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。
本裂解液提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白，下游應用范圍廣，提取液裂解細胞的能力較溫和，需要根據(jù)實際樣本情況優(yōu)化裂解時間。
本裂解液中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。
本裂解液提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用貝博其他貨號的試劑盒（相關產(chǎn)品BB-3181）。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（相關產(chǎn)品BB-38113）。
貝博® BBproExtra® 可以提供針對動物細胞、組織、植物、真菌、酵母、微生物、藻類、液體、土壤等各種不同樣本的蛋白提取試劑盒。
貝博® BBproExtra® 可以提供針對細胞膜、核、胞質、線粒體、溶酶體、高爾基體、內(nèi)質網(wǎng)、外泌體等細胞不同部位的蛋白提取試劑盒。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
2.蛋白酶抑制劑從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
1年
檢測方法
WB、IP等
適用樣本
細胞、組織
產(chǎn)品特點
1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
產(chǎn)品應用
WB、IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒 7.勻漿機/勻漿器
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒 7.勻漿機/勻漿器
試劑準備
1.PBS緩沖液 （pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
2.蛋白定量試劑盒
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
? 離心管
? 吸頭
? 一次性手套
? 吸頭
? 一次性手套
使用注意事項
1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
2.實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
3.蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
4.如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
5.可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
6.下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。
2.實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
3.蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
4.如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
5.可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
6.下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。
使用方法
A． 細胞裂解
1. 裂解液制備：
每1ml冷的RIPA蛋白裂解液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取5-10×106個細胞，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞。
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106個細胞中加入500 μl冷的裂解液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5. 在4℃，12000-14000×g條件下離心10分鐘。
6. 快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，用于下游實驗。
B． 組織裂解
1. 裂解液制備：每1ml冷的RIPA裂解液加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取100mg組織樣本剪碎，加入1ml裂解液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿在4℃振蕩15-25分鐘。
4. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
5. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，用于下游實驗。
上述蛋白提取物可分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/div>
1. 裂解液制備：
每1ml冷的RIPA蛋白裂解液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取5-10×106個細胞，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞。
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106個細胞中加入500 μl冷的裂解液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5. 在4℃，12000-14000×g條件下離心10分鐘。
6. 快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，用于下游實驗。
B． 組織裂解
1. 裂解液制備：每1ml冷的RIPA裂解液加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取100mg組織樣本剪碎，加入1ml裂解液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿在4℃振蕩15-25分鐘。
4. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
5. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，用于下游實驗。
上述蛋白提取物可分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/div>
常見問題分析
1.細胞裂解速度慢？
為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用獨特的保護蛋白的配方，裂解能力溫和，下游應用范圍廣。適當延長裂解的時間即可。
2.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有全部裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
3.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
4.提取時出現(xiàn)膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續(xù)實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，不必進行超聲處理。
5.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。
為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用獨特的保護蛋白的配方，裂解能力溫和，下游應用范圍廣。適當延長裂解的時間即可。
2.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有全部裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
3.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
4.提取時出現(xiàn)膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續(xù)實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。檢測一些常見的轉錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，不必進行超聲處理。
5.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。
參考文獻
1.An S.J., et al.
Characterization and Functions of Vascular Adventitial Fibroblast Subpopulations
Cell Physiol Biochem 2015 （IF=5.5）
2.Fei Ye, Ting Zhao, et al.
Long-term Autophagy and Nrf2 Signaling in the Hippocampi of Developing Mice after Carbon Ion Exposure
Sci Rep. 2015 （IF=5.228）
3.An S.J. Liu P. Shao T.M. et al.
Characterization and Functions of Vascular Adventitial Fibroblast Subpopulations
Cell Physiol Biochem 2015 （IF=4.652）
4.Lu, Zongliang; Zhou, Rui; Kong, Ya, et al.
S-equol, a Secondary Metabolite of Natural Anticancer Isoflavone Daidzein, Inhibits Prostate Cancer Growth In Vitro and In Vivo, Though Activating the Akt/FOXO3a Pathway
Current Cancer Drug Targets 2016 （IF=3.707）
5.Pin Huan, Hongxia Wang et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Journal of Proteomics 2012 （IF=5.074）
Characterization and Functions of Vascular Adventitial Fibroblast Subpopulations
Cell Physiol Biochem 2015 （IF=5.5）
2.Fei Ye, Ting Zhao, et al.
Long-term Autophagy and Nrf2 Signaling in the Hippocampi of Developing Mice after Carbon Ion Exposure
Sci Rep. 2015 （IF=5.228）
3.An S.J. Liu P. Shao T.M. et al.
Characterization and Functions of Vascular Adventitial Fibroblast Subpopulations
Cell Physiol Biochem 2015 （IF=4.652）
4.Lu, Zongliang; Zhou, Rui; Kong, Ya, et al.
S-equol, a Secondary Metabolite of Natural Anticancer Isoflavone Daidzein, Inhibits Prostate Cancer Growth In Vitro and In Vivo, Though Activating the Akt/FOXO3a Pathway
Current Cancer Drug Targets 2016 （IF=3.707）
5.Pin Huan, Hongxia Wang et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Journal of Proteomics 2012 （IF=5.074）
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