CCK-8細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(Cell Counting Kit-8)是一種基于 WST-8(水溶性四唑鹽)的快速、靈敏檢測(cè)細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒性的工具,廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、藥理學(xué)等領(lǐng)域。
其核心原理是:試劑盒中的WST-8在電子載體 1-Methoxy PMS 的作用下,被細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶(主要是線粒體活性脫氫酶)還原為橙黃色的甲臜(Formazan)。生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比 —— 活細(xì)胞越多,脫氫酶活性越高,甲臜生成量越多,在 450nm 處的吸光度(OD 值)也越高。
主要應(yīng)用場(chǎng)景
細(xì)胞增殖檢測(cè):評(píng)估細(xì)胞在不同培養(yǎng)條件(如藥物、血清濃度)下的生長(zhǎng)能力。
細(xì)胞毒性檢測(cè):檢測(cè)藥物、毒素等對(duì)細(xì)胞的損傷或抑制作用(活細(xì)胞減少,OD 值降低)。
優(yōu)勢(shì)
操作簡(jiǎn)便:無(wú)需洗滌細(xì)胞,直接向培養(yǎng)體系中加入 CCK-8 試劑,孵育后即可檢測(cè)。
靈敏度高:比 MTT 法更靈敏,且無(wú)放射性污染。
適用性廣:適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞,對(duì)細(xì)胞毒性小,可用于長(zhǎng)期動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。
基本操作步驟
細(xì)胞接種到 96 孔板,培養(yǎng)至合適密度;
加入待測(cè)藥物或處理因素,孵育特定時(shí)間;
每孔加入 10μL CCK-8 試劑(按 1:10 比例與培養(yǎng)基混合);
37℃孵育 1-4 小時(shí)(根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整時(shí)間);
酶標(biāo)儀檢測(cè) 450nm 處的 OD 值,分析結(jié)果。
BB-41033 Annexin V-APC / PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
BB-410332 Annexin V-APC / NucGreen 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
BB-41034 Annexin V-APC / 7-AAD 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
BB-41035 Annexin V Alexa Fluor 647 / PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
BB-41036 Annexin V Alexa Fluor 647 / 7-AAD 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
BB-410362 Annexin V Alexa Fluor 647 / NucGreen 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
BB-41037 Annexin V Alexa Fluor 660 / PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
BB-41038 Annexin V Alexa Fluor 660 / 7-AAD 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
BB-410382 Annexin V Alexa Fluor 660 / NucGreen 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
BB-41039 Annexin V-PE-Cyanine5 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
BB-4104 細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒(PI)
BB-41043 細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒
BB-41044 細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒
CCK-8細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒
貝博生物專注于生命科學(xué)研究用試劑產(chǎn)品的研究、開(kāi)發(fā)、市場(chǎng)推廣和技術(shù)服務(wù)。致力于為中國(guó)廣大客戶提供量身定制的科研用試劑產(chǎn)品和專業(yè)技術(shù)服務(wù),幫助科研人員加速生物領(lǐng)域的研究進(jìn)展。 貝博生物將以高品質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù)打造實(shí)力的試劑品牌。
目前已上市了600多種蛋白提取試劑盒(動(dòng)物、植物、細(xì)菌、昆蟲(chóng)、酵母等樣本及細(xì)胞器提?。?strong style="white-space: normal;">CCK-8細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒及上千種的細(xì)胞檢測(cè)的相關(guān)產(chǎn)品-細(xì)胞凋亡、增殖毒性、細(xì)胞周期、膜電位檢測(cè)、細(xì)胞器熒光探針、活性氧ROS檢測(cè)、細(xì)胞自噬、細(xì)胞耗氧OCR、細(xì)胞外酸化率ECAR、缺氧檢測(cè)、粘附檢測(cè)、鈣離子檢測(cè)、膜通透性轉(zhuǎn)換孔檢測(cè)、膜流動(dòng)性檢測(cè)、外泌體、囊泡提取等。
常見(jiàn)問(wèn)題:
Q1: CCK-8試劑盒相比傳統(tǒng)的MTT法有哪些優(yōu)勢(shì)?
A1: CCK-8生成的甲臜染料是水溶性的,無(wú)需換液和溶解步驟,操作更簡(jiǎn)便;且靈敏度更高,對(duì)細(xì)胞毒性更小,可用于動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。
Q2: 如何確定加入CCK-8試劑后的最佳孵育時(shí)間?
A2: 最佳時(shí)間因細(xì)胞類型和數(shù)量而異??赏ㄟ^(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn),在加試劑后于不同時(shí)間點(diǎn)(如0.5、1、2、4小時(shí))檢測(cè)吸光度,選擇OD值處于線性增長(zhǎng)區(qū)間的時(shí)間點(diǎn)。
Q3: 如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果背景值很高或波動(dòng)大,可能是什么原因?
A3: 可能原因包括:培養(yǎng)基中酚紅指示劑的干擾、細(xì)胞死亡過(guò)多、試劑污染或含有氧化還原物質(zhì)。建議使用無(wú)酚紅培養(yǎng)基,并設(shè)置無(wú)細(xì)胞的空白孔對(duì)照。
Q4: CCK-8法能否直接用于體內(nèi)或組織樣本的檢測(cè)?
A4: 不能。CCK-8法專為體外培養(yǎng)的細(xì)胞設(shè)計(jì),需要細(xì)胞具有正常的代謝活性。對(duì)于組織樣本,需先制備成單細(xì)胞懸液后才能進(jìn)行檢測(cè)。
Q5: CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞毒性時(shí),如何設(shè)置實(shí)驗(yàn)對(duì)照組?
A5: 通常需設(shè)置:空白對(duì)照組(只有培養(yǎng)基)、對(duì)照組(未處理細(xì)胞)、實(shí)驗(yàn)組(藥物處理細(xì)胞)。計(jì)算時(shí)需用實(shí)驗(yàn)組OD值減去空白組,再與對(duì)照組比較。
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