大鼠動物髓核細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法

頸椎脫臼法處死SD大鼠。

剃去背毛，75%酒精浸泡5min。

從尾椎處剪開皮膚，取出腰椎。

盡量剔除附著的肌肉，用含2%雙抗的PBS沖洗3-5次。

分離椎節(jié)，切開纖維環(huán)分離凝膠狀髓核，將凝膠狀髓核置于PBS中沖洗 3 次，去除血跡，剪碎髓核組織呈 1mm³大小，移至離心管后加入5倍體積的1.5%Ⅱ型膠原酶，37℃搖床消化2h。

消化結(jié)束 ，20%FBS終止消化，100um濾網(wǎng)過濾，1000r/min 離心 5min，棄上清后DMEM/F12 重懸，按 1×10⁵/ml接種于培養(yǎng)板，加入含1%雙抗和 15% FBS 的 DMEM/F12，置于37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4 d后換液，以后每3天換 液 1 次，細(xì)胞達(dá) 90% 融合后傳代。

大鼠動物髓核細(xì)胞的原代培養(yǎng)評價

原代細(xì)胞(primary cell)：是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。